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    細毛樟和草莓番石榴的化學成分及其生物活性探討

    論文堡 日期:2023-09-17 16:44:13 點擊:358

    本文是一篇藥學論文,本論文研究的兩種對象植物均為藥食兩用植物,并且目前的系統(tǒng)性化學成分研究較少,具有研究意義。從中分離鑒定的化合物類型多樣,豐富了該屬植物的化合物內(nèi)容。
    1 細毛樟的化學成分及其抗氧化活性研究
    1.1 引言
    1.1.1 樟屬植物概況
    樟屬(cinnamomum)作為樟科(lauraceae)中一個龐大的屬,約有250種,主要分布于熱帶亞熱帶亞洲東部、澳大利亞及太平洋島嶼。樟屬植物以其廣泛而出色的食用和藥用價值而著名。許多植物可謂全身是寶,目前研究較為成熟的肉桂(c. cassia),其枝、葉、果實等部位皆可提取桂油,并廣泛用于醫(yī)藥、食品、化工和化妝品添加劑中。此外,其干燥樹皮本身就是一種天然香料和中藥,具有溫中補腎、散寒止痛功能,目前已收錄于《中國藥典》。另一種名貴植物錫蘭肉桂(c. zeylanicum)在傳統(tǒng)用藥中具有祛風健胃的功效,常用于治療消化不良、糖尿病、痤瘡以及呼吸和泌尿問題等。過去的研究,已經(jīng)通過超臨界co2萃取、蒸汽蒸餾等方法從許多樟屬植物中獲取了豐富的揮發(fā)性物質(zhì),比如肉桂醛、桉葉油、樟腦等,研究結(jié)果表明大多揮發(fā)性成分具有良好的抗菌、抗真菌、抗氧化、抗酪氨酸酶作用。不僅如此,目前也已從樟屬植物中分離獲得了木脂素類、萜類、黃酮類、酚類以及丁內(nèi)酯類等多種非揮發(fā)性代謝產(chǎn)物,部分化合物同樣表現(xiàn)出優(yōu)異的抗氧化、細胞毒活性、抗酪氨酸酶、免疫調(diào)節(jié)以及神經(jīng)保護等多種生物活性。由此,樟屬植物從各個方面都有巨大的研究開發(fā)潛力
    1.1.2 樟屬植物中的化學成分研究進展
    ①木脂素及新木脂素類
    木脂素及新木脂素類化合物在植物化學中廣泛存在,同時是樟屬中很重要且含量較高的一類次生代謝產(chǎn)物。其結(jié)構(gòu)類型多樣,目前已從樟屬植物分離鑒定了二芐基丁烷型(35-37)、駢雙四氫呋喃型(1、30-32)、芳基萘型(20-22)、倍半木脂素(13-19、33-34)二倍木脂素(26-27)以及聯(lián)苯型(4-5)等多種類型的木脂素類化合物。樟屬也發(fā)現(xiàn)了一些結(jié)構(gòu)特別的木脂素類化合物,比如x. liu等從 香桂(c. subavenium)中分離得到兩對具有新穎外消旋螺二烯酮的新木脂素[20](9-12)。值得一提的是,化合物(8)是2-苯乙烯基-3-苯基四氫呋喃骨架第一個天然新木脂素。本論文對細毛樟的化學成分研究中,也分離鑒定了18個木脂素類化合物,其中4個駢雙四氫呋喃類木脂素和和1個新木脂素為新化合物。

    藥學論文參考

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    1.2 結(jié)果與討論
    1.2.1 細毛樟中分離鑒定的化合物
    經(jīng)過多種分離鑒定方法,從細毛樟(c. tenuipilum)中分離、純化并鑒定了26個單體化合物,包括18個木脂素類(1-17、26)、3個酚苷類(18-20)、3個黃酮類(21-23)以及2個苯丙烷類化合物(24-25)。其中4個木脂素(7-10)、1個新木脂素(14)以及2個酚苷類(18和19)化合物為新化合物(紅色*標記)。新化合物通過核磁、圓二色譜、質(zhì)譜、旋光等多種分析方式進行結(jié)構(gòu)鑒定,已知化合物通過核磁等波譜數(shù)據(jù)結(jié)合文獻進行鑒定。對細毛樟中分離鑒定的所有化合物開展了細胞毒性和dpph自由基清除抗氧化活性篩選,離子通道活性正處于檢測之中。

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    2.2 結(jié)果與討論
    2.2.1 草莓番石榴中分離鑒定的化合物
    利用現(xiàn)代提取分離技術(shù),從藥食同源植物草莓番石榴(p. littorale)中分離鑒定了22個單體化合物包括3個雜萜(27-29)、8個倍半萜(30-37)、1個三萜(38)、3個酚苷(39-41)、3個黃酮(42-44)、3個木脂素(45-47)以及1個苯丙烷類(48)化合物。其中3個雜萜化合物為新化合物(紅色*標記)。新化合物通過核磁、高分辨質(zhì)譜、圓二色譜以及旋光等多種分析手段進行結(jié)構(gòu)鑒定。已知化合物通過核磁等波譜數(shù)據(jù)結(jié)合文獻進行鑒定。
    化合物27為淡黃色油狀化合物,通過高分辨質(zhì)譜hr-esims準分子離子峰 m/z 463.2807 [m + na]+ (c28h40o4na,計算值463.2819),439.2853 [m-h(huán)]- (c28h39o4,計算值439.2854),推斷其分子式為c28h40o4,分子不飽和度為9。通過1h nmr圖譜分析,化合物27的結(jié)構(gòu)包括:7個甲基[δh 1.02 (s, me-12), 1.06 (s, me-13), 1.63 (s, me-14), 1.14 (s, me-15), 2.07 (s, me-8′), 0.94 (d, j = 6.6 hz, me-12′), 0.97 (d, j = 6.6 hz, me-13′)]、6個亞甲基[δh 1.77 (dd, j = 12.9, 4.4 hz, h-1a), 2.19 (m, h-1b), 1.86 (m, h-4a), 2.93 (m, h-4b), 1.35 (dd, j = 13.7, 10.8 hz, h-5a), 1.17 (m, h-5b), 2.16 (d, j = 14.7 hz, h-8a), 2.37 (m, h-8b); 2.93 (m, h-7?a), 2.08 (m, h-7?b), 2.96 (m, h-10?a), 2.9 (m, h-10?b)]、5個次甲基含有2個sp3次甲基[δh 1.86 (m, h-6), 2.23 (m, h-11?)]和3個烯烴氫[δh 5.03 (dd, j = 11.8, 3.4 hz, h-2), 5.16 (m, h-9), 5.16 (m, h-10)]。綜合13c nmr和hsqc圖譜可以分析化合物27共28個碳:7個甲基碳、6個亞甲基碳、2個sp3次甲基碳、3個sp2次甲基碳、10個季碳包括1個酮羰基(δc 206.2)、7個sp2季碳、1個sp3季碳、1個氧化的sp3季碳。再依據(jù)hsqc圖譜中有2個氫信號無對應碳信號,將其歸為羥基信號。
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    2.3 實驗部分
    2.3.1 儀器與試劑
    ①儀器
    核磁共振波譜儀:agilent 400mr dd2、agilent 600mr dd2(美國 agilent 公司);半制備高效液相色譜儀:nu3000c(江蘇漢邦科技有限公司);質(zhì)譜儀(hr-esims):bruker apex-ultra fticr(美國 agilent 公司);圓二光譜儀:mos-450 (法國bio-logic公司);紫外可見光譜儀(uv):cary 60 (美國 agilent 公司); 傅里葉紅外光譜儀(ir): tensor-27 (德國bruker公司);旋光光譜儀:autopol i±89°arc(法國rudolph公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:rv8v(艾卡廣州儀器設(shè)備有限公司);循環(huán)水式多用真空泵:shz-d(鄭州生化儀器有限公司);真空泵:mvp-10b-s025(艾卡廣州儀器設(shè)備有限公司);低溫冷卻循環(huán)泵:dlsb-5/20(鄭州長城科工貿(mào)有限公司);超聲清洗器:kh 5200e(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司);精密電子天平:me203e、me204e(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);電子天平:yp2001(上海精密儀器有限公司);電熱鼓風干燥箱:gzx-9246(上海博迅實業(yè)有限公司);粉碎機:df-25(溫州市林大機械有限責任公司);暗箱三用紫外分析儀:zf-20d;熱風槍: hl-1610s(德國登利steinel公司);-86℃超低溫冷凍儲存箱:dw-hl 388(中科美菱低溫科技有限責任公司);醫(yī)用低溫箱:dw-yl 270(中科美菱低溫科技有限責任公司);色譜柱:pack ods-a column (250×10 mm, 5 μm, 12 nm)(日本ymc公司)。
    ②溶劑
    分析純?nèi)軇菏兔选⒁宜嵋阴ァ⒍燃状肌⒓状肌?5%乙醇、無水乙醇、濃硫酸(成都科隆化學品有限公司);色譜純?nèi)軇杭状肌⒁译妫ǔ啥伎坡』瘜W品有限公司);分析純易制毒溶劑:丙酮、三氯甲烷(重慶川東化工集團有限公司);氘代試劑:氘代氯仿、氘代二甲基亞砜(美國cambridge isotope laboratories 公司;柱層析硅膠填料:200-300目(煙臺江友硅膠有限公司);薄層色譜硅膠板:gf254(煙臺江友硅膠有限公司);凝膠填料:sephadex-20(ge healthcare);mci-gel填料:ghp 20p 75-150 μm(mitsubishi chemical industries ltd);通用顯色劑:5%-10%硫酸乙醇溶液(自配)。
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    2 草莓番石榴的化學成分及其細胞毒活性研究
    2.1 引言
    2.1.1 番石榴屬植物概況
    番石榴屬(psidium)作為桃金娘科(myrtaceae)的眾屬之一,產(chǎn)于美洲熱帶地區(qū),約有150種。目前我國只引入了番石榴(p. guajava)和草莓番石榴(p. littorale)2種。番石榴屬植物作為藥食同源植物,具有豐富的營養(yǎng)和藥用價值。其中番石榴俗稱拔子、雞矢果、芭樂等,現(xiàn)有報道對其研究相對深入。一方面,因為其具有芳香性的可食用水果能夠加工成為果汁、果醬等產(chǎn)品,而深受人們的喜愛。另一方面,在非洲和亞洲地區(qū),番石榴葉子長期作為民間藥物,用于治療糖尿病、腹瀉以及高血壓等疾病。在日本含有番石榴提取物的茶葉已經(jīng)上市,并且已被批準為具有健康用途的產(chǎn)品。不僅如此,從番石榴的枝葉、樹皮以及果實中提取分離了許多以雜萜為典型代表的各類次級代謝產(chǎn)物,研究顯示許多化合物具有降血糖、抗菌、抗腫瘤等廣泛的生物活性。對這些天然產(chǎn)物的研究,在豐富了番石榴屬植物本身的同時,更為開發(fā)不同特性的藥物提供了理論和依據(jù)。
    2.1.2 番石榴屬植物中的化學成分研究進展
    雜萜類化合物存在于桃金娘科(myrtaceae)的桉屬(eucalyptus)、桃金娘屬(rhodomyrtus)和番石榴屬(psidium)中,也是番石榴屬植物的特征化合物,通常以單萜(1-4)或倍半萜與間苯三酚結(jié)構(gòu)偶聯(lián),其中萜類部分碳骨架結(jié)構(gòu)新穎且復雜多變,多為重排的6/7/8元環(huán),目前的報道中,以石竹烯型倍半萜較多。由于此類化合物的生物活性優(yōu)異,受到了許多合成專家的青睞,也有許多學者致力于探索此類化合物的生源途徑。對番石榴屬雜萜類化合物的報道中,此類化合物大多存在3,5-二甲酰基-芐基間苯三酚部分和二氫吡喃環(huán)的連接結(jié)構(gòu)。值得一提的是,j. q. hou等[74]人從番石榴(p. guajava)中分離獲得了一系列倍半萜骨架重排的雜萜化合物,其中化合物(21-23)具有前所未有的c-8螺旋融合的6/6/9/4四環(huán)系統(tǒng)骨架。此外,二聚體也是雜萜中少見且復雜的類型,x. l. yang等人和s. ning等[70]人都從番石榴中分離出了二聚體雜萜(28-29),其中diguajadial (28)通過醚鍵相連。而后c. j. li等人同樣從番石榴中分離了一個二聚石竹烯倍半萜雜萜,其擁有芐基間苯三酚和黃酮融合的復雜立體化學骨架(27)。
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    3 全文總結(jié)
    本論文對樟屬細毛樟和番石榴屬草莓番石榴兩種藥用植物進行了系統(tǒng)的化學成分研究以及初步的生物活性篩選。利用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜以及半制備高效液相色譜等多種分離方法,結(jié)合核磁、質(zhì)譜、圓二色譜以及紅外等多種分析手段,共分離鑒定了48個化合物,其中10個新化合物。化合物類型涵蓋木脂素類、黃酮類、酚苷類、雜萜類、三萜、倍半萜以及苯丙烷等多種類型。以木脂素居多,有倍半木脂素、二倍木脂素,包括駢雙四氫呋喃型、芳基萘型等類型。黃酮有二氫黃酮、黃酮苷、黃酮醇等類型,倍半萜有杜松烷型、石竹烯型。
    新化合物中包括4個駢雙四氫呋喃類木脂素、1個新木脂素、2個單萜連糖的酚苷以及3個雜萜類化合物。其中木脂素類化合物是樟屬植物的主要化合物之一,從草莓番石榴中分離的雜萜化合物是番石榴屬植物的特征化合物。
    通過dpph自由基清除實驗,對細毛樟中分離鑒定的化合物進行了抗氧化活性評估,結(jié)果顯示出木脂素類化合物的顯著活性,其中化合物12-13、15-17和23的ic50均小于35 μmol/l,活性非常好,化合物1-4和新化合物19的ic50均小于85 μmol/l顯示出中等的抗氧化活性,另一新化合物7的ic50為114.6 μmol/l,活性強于陽性對照。采用mtt法,測定草莓番石榴中分離鑒定的部分化合物的細胞毒性活性,結(jié)果顯示新化合物29對人結(jié)腸癌hct-116細胞有中等抑制活性,其ic50值為47.4±3.7 μmol/l,具有抗腫瘤活性潛力。

    參考文獻(略)

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